Products
-
-
EIS05885Ra
大鼠白细胞介素 6（IL-6 ELISpot）酶联免疫斑点试剂盒
-
Assay Range：96 孔PVDF板
-
Sensitivity：3-4小时
-
Specification：96T
-
Storage Conditions：-20℃；短期可 4℃保存，最长不超过 2 周
-
Purpose：用于定量检测分泌大鼠 IL-6 的细胞频率
-
Application：免疫斑点
Download The Manual
-
Kit Components
|
Component
|
96 Servings
|
48 Servings
|
Storage Conditions
|
|
预包被酶标板
|
8×12 拆条
|
8×6 拆条
|
4℃ / -20℃
|
|
阳性对照品 (6ng)
|
2 瓶
|
1 瓶
|
4℃ / -20℃
|
|
生物素化抗体 (1:100)
|
1 瓶
|
1 瓶
|
4℃ / -20℃
|
|
酶结合物 (1:100)
|
1 瓶
|
1 瓶
|
4℃ / -20℃
|
|
抗体稀释液
|
1 瓶
|
1 瓶
|
4℃ / -20℃
|
|
酶稀释液
|
1 瓶
|
1 瓶
|
4℃ / -20℃
|
|
洗涤液 (1:25)
|
1 瓶
|
1 瓶
|
4℃ / -20℃
|
|
显色液 (BCIP/NBT 底物)
|
1 瓶
|
1 瓶
|
4℃ / -20℃
|
Attention
洗涤液：浓缩洗涤液用双蒸水按 1:25 稀释，未用完的试剂放回试剂盒保存。
大鼠 IL-6 ELISpot 阳性对照：冻干粉阳性对照用 250 μL 细胞培养培养液复溶。
大鼠 IL-6 ELISpot 检测抗体工作液：根据待检孔数取适量生物素化抗体，用抗体稀释液按 1:100 稀释，充分混匀。提前 30 分钟配制，稀释后不可重复使用。
链霉亲和素 - 碱性磷酸酶（Streptavidin-AP）工作液：根据待检孔数取适量酶结合物，用酶稀释液按 1:100 稀释，充分混匀。提前 30 分钟配制，稀释后不可重复使用。
Self-Prepared Equipment
- 解剖显微镜 或 ELISpot 读板仪
- 移液器及吸头
- 去离子水
- 洗瓶、多通道分液仪或全自动酶标洗板机
Other Self-Provided Materials
- 500 mL 量筒
- 37 ℃ CO₂ 培养箱
- 无菌培养液
Sample Collection and Preparation
Sample Preparation
01.样本制备
效应细胞、反应细胞的种类、细胞分离方法、刺激方式及孵育时间由研究者自行确定。
02.细胞浓度
常规：1×10⁵～5×10⁵ 个细胞 / 孔，根据细胞因子分泌强弱微调。
03.细胞来源与活率
分离 PBMC / 脾细胞 / 淋巴结细胞，活细胞率≥90%，死细胞过多非特异斑点暴增； 分离全程冰上操作，预冷培养基，减少细胞凋亡。
04.刺激物（抗原 / 刺激剂）配制
刺激剂提前用培养级 PBS / 培养基稀释，去除防腐剂。
Experimental Procedure
Experimental Procedure
Result Calculation
可通过解剖显微镜或 ELISpot 读板仪计数斑点，对显色后的酶标板进行结果判读。特异性斑点呈圆形，中心颜色较深，边缘略弥散。可对结果进行定量分析。
Performance Metrics
大鼠白细胞介素 6（IL-6 ELISpot）酶联免疫斑点试剂盒 Typical Data
|
按照实验步骤将样本在7 个孔中进行检测，并使用解剖显微镜进行判读分析。
|
Reference STD1
|
Reference STD2
|
Reference STD3
|
Reference STD4
|
Reference STD5
|
Reference STD6
|
Reference STD7
|
|
|
孔号
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
|
|
计数斑点数
|
172
|
180
|
168
|
170
|
131
|
168
|
163
|
Precautions
-
01复溶后的阳性对照不可保存，一旦复溶严禁再次冻存。
-
02因运输过程中振荡或倒置，需将试剂盒内试剂管 / 瓶进行离心，使内容物沉至管底。可手动涡旋混匀，或以 1000 rpm 离心 1 分钟。
-
03浓缩洗涤液可能出现轻微结晶，稀释时可水浴加热助溶，使用前必须确保结晶完全溶解。
-
04配制好的阳性对照仅限一次性使用，已用于实验的对照不可重复使用。如需重复实验，请使用另一瓶对照。
-
05仅使用本试剂盒配套试剂及组分，不得混用不同批次、不同订单或不同型号试剂盒的组分。
-
06确保所有试剂充分混匀，加入酶标板的试剂必须混匀，这是获得准确结果的关键。
-
07实验开始前，将试剂盒恢复至室温。
-
08短期使用的未用完酶标板条，应放回原铝箔袋中，于 2～8℃ 保存。
-
09过期试剂盒严禁使用。
-
10所有样本、洗涤液及废弃物均按生物危害性废物处理。
-
11必须使用经校准的移液器或类似仪器加样，实验前校准仪器以避免误差。快速加样，总加样时间控制在 5 分钟内，建议使用多道移液器。
-
12定期校准培养箱，确保 37℃ 孵育温度稳定
-
1348 孔 ELISpot 试剂盒中，所有组分体积均为 96 孔试剂盒的 50%。