Products
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EIAM26001
人IL-1β,IL-2,IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ 多因子酶联免疫试剂盒
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Assay Range：IL-1β,IL-6：7.8-500pg/mL；IL-2,IL-10,TNF-α,IFN-γ：15.6-1000pg/mL
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Sensitivity：IL-1β,IL-6：1.8pg/mL；IL-2,IL-10,TNF-α,IFN-γ：3.5pg/mL
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Specification：96T（96孔/96次测试）
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Storage Conditions：-20℃保存（短期储存可在4℃条件下进行，例如约2周）。
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Application：多因子试剂盒
Download The Manual
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Kit Components
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Component
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96 Servings
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48 Servings
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Storage Conditions
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单因子预包被板
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8×12
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8×6
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4/-20℃
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人 IL-1β,IL-2,IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ预混合标准品
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2 管
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1管
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4/-20℃
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人 IL-1β,IL-2,IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ预混合生物素标记抗体(1:100)
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1管
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1管
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4/-20℃
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酶结合物(1:100)
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1管
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1管
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4/-20℃
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酶稀释液
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1管
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1管
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4/-20℃
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人 IL-1β,IL-2,IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ预混合生物素标记抗体稀释液
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1管
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1管
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4/-20℃
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预混合标准品稀释液
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1管
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1管
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4/-20℃
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样品稀释液
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1管
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1管
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4/-20℃
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洗涤液（1:25稀释）
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1管
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1管
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4/-20℃
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显色液 A
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1管
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1管
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4/-20℃
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显色液 B
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1管
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1管
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4/-20℃
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显色液 C
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1管
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1管
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4/-20℃
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说明书
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1 份
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1 份
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RT
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Attention
RT:室温
人白细胞介素-1β、白细胞介素-2、白细胞介素-6、白细胞介素-10、肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ 标准品：冻干粉
显色液 A：避光保存
Self-Prepared Equipment
- 酶标仪（450nm 检测波长滤光片，可选配 570nm 或 630nm 校正波长滤光片）
- 洗板机（可调节注液量，确保每孔加液 350μL 且不溢出）
- 净化工作台、生物安全柜、通风橱
- 高精度单通道移液器（量程：0.5-10μL、20-200μL、200-1000μL）
- 高精度多通道移液器（8 道或 12 道，量程：50-300μL）
- 37℃ 恒温培养箱
- 低温离心机
- 冰箱（4℃、-20℃、-86℃）
- 分析天平
- 剪刀、镊子、钳子等
- 微孔板振荡器、低频振荡器等
Other Self-Provided Materials
- 离心管（容量：1.5mL、5mL 等）
- 一次性移液器吸头（量程：0.5-10μL、20-200μL、200-1000μL）
- 纯水或蒸馏水
- 坐标纸
- 吸水纸
Sample Collection and Preparation
Sample Preparation
01.
采血试管须无热原、无内毒素。
02.
不建议使用溶血或高脂血标本。
03.
样本最终应清亮、基本透明。所有颗粒物均需通过离心去除。
04.
若采集的样本不能立即使用，应按单次用量分装，并于 -20～-80℃ 冷冻保存，严格避免反复冻融。
05.
为使样本读数处于标准曲线有效范围内，通常需要对样本进行稀释优化。建议在大批量检测前先进行预实验，以确定样本是否需要优化稀释。
06.
建议采集足量样本用于多次检测，以避免因部分用户操作等问题导致数据丢失。
07.
采集及处理样本时，必须穿戴防护用品（如手套、实验服、呼吸器等），并注意处理标本过程中的所有潜在风险。
08.
标本处理应在维护良好的生物安全柜内进行。
09.血清
采集的全血置于 4℃冰箱过夜。然后以 1000–3000 rpm 离心 10 分钟，取上清，立即检测或于 - 20℃/-80℃保存（1–3 个月）。
10.血浆
采用添加 EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂的血浆，充分混匀。以 1000–3000 rpm 离心 10 分钟，取上清，立即检测或于 - 20℃/-80℃保存（1–3 个月）。
11.组织匀浆
取用 0.01M PBS 洗涤过的组织块，按 1g 组织加入 5–10 mL 组织蛋白提取试剂的比例，在冰浴条件下混匀。充分匀浆后，以 5000–10000 rpm 离心 10 分钟，取上清立即检测，或于 - 20℃/-80℃保存（1–3 个月）。
12.细胞培养上清
以 1000–3000 rpm 离心 10 分钟，取上清立即检测，或于 - 20℃/-80℃保存（1–3 个月）。
13.尿液、腹水、脑脊液等
以 1000–3000 rpm 离心 10 分钟，取上清立即检测，或于 - 20℃/-80℃保存（1–3 个月）。
Precautions
建议使用者充分了解待测样本的预期浓度范围。可查阅相关学术文献中同类样本的浓度参考，并据此考虑对样本进行稀释。
Experimental Preparation
1. 请提前 20 分钟将人 IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ 多因子 ELISA 试剂盒从冰箱取出，恢复至室温后开始实验。
2. 浓缩洗涤液用双蒸水按 1:25 稀释，未用完的洗涤液放回试剂盒内保存。
3. 标准品：向冻干粉标准品瓶中加入 1.0 mL 标准品稀释液，静置 30 分钟。待标准品完全溶解后，轻轻混匀并做好标记。
4. 标准品稀释方法说明：取 7 支洁净离心管，分别标记②、③、④、⑤、⑥、⑦、⑧。每管加入 300 μL 标准品稀释液。从①管吸取 300 μL至②管，混匀；再从②管吸取 300 μL 至③管，混匀；重复上述步骤至⑦管。⑧管为阴性对照。
5. 复溶后的标准品储备液不可重复使用。
6. 生物素化抗体：根据待检测孔位数取适量生物素化抗体，用抗体稀释液按 1:100 稀释。需提前 30 分钟配制，严禁重复使用。
7. 酶结合物：根据待检测孔位数取适量酶结合物，用酶稀释液按 1:100 稀释。需提前 30 分钟配制，严禁重复使用。
8. 显色液：显色液 A 与显色液 B 按 9:1 比例混合，提前 30 分钟配制。
Experimental Procedure
Experimental Procedure
Result Calculation
以标准品浓度为X 轴，OD 值为Y 轴，用平滑曲线连接各标准品坐标点。将样本 OD 值代入标准曲线方程，即可得出对应样本浓度。建议使用专业拟合软件（如 Curve Expert 1.3）进行分析与计算。
Performance Metrics
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Concentration
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Reference STD1
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Reference STD2
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Reference STD3
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Reference STD4
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Reference STD5
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Reference STD6
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Reference STD7
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Reference STD8
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IL-1β,IL-6
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500
|
250
|
125
|
62.5
|
31.25
|
15.625
|
7.813
|
0
|
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IL-2,IL-10,TNF-α,IFN-γ
|
1000
|
500
|
250
|
125
|
62.5
|
31.25
|
15.625
|
0
|
人IL-1β,IL-2,IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ 多因子酶联免疫试剂盒 Typical Data
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Reference STD1
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Reference STD2
|
Reference STD3
|
Reference STD4
|
Reference STD5
|
Reference STD6
|
Reference STD7
|
Reference STD8
|
|
|
IL-1β
|
2.813
|
1.598
|
0.908
|
0.516
|
0.293
|
0.167
|
0.095
|
0.054
|
|
IL-6
|
2.444
|
1.389
|
0.789
|
0.448
|
0.255
|
0.145
|
0.082
|
0.047
|
|
IL-2
|
2.751
|
1.618
|
0.952
|
0.560
|
0.329
|
0.194
|
0.114
|
0.067
|
|
IL-10
|
2.983
|
1.695
|
0.963
|
0.547
|
0.311
|
0.177
|
0.100
|
0.057
|
|
TNF-α
|
2.282
|
1.746
|
1.078
|
0.665
|
0.411
|
0.253
|
0.156
|
0.097
|
|
IFN-γ
|
2.404
|
1.366
|
0.776
|
0.441
|
0.251
|
0.142
|
0.081
|
0.046
|
人IL-1β,IL-2,IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ 多因子酶联免疫试剂盒 Standard Curve
此标准曲线仅供参考，每次检测均应重新绘制标准曲线。
人IL-1β,IL-2,IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ 多因子酶联免疫试剂盒 Linear
为评估检测方法的线性，向样本中加入高浓度的人 IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN γ，并用相应的校准品稀释液进行梯度稀释，使样本浓度落在检测的线性范围内。
人IL-1β,IL-2,IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ 多因子酶联免疫试剂盒 Recovery Rate
在多种基质中，分别在检测范围内对人 IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ 进行加标回收验证，并对回收率进行评价。.
人IL-1β,IL-2,IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ 多因子酶联免疫试剂盒 Recovery Rate
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Matrix
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Scope %
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Average % Recovery Rate
|
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血清（n=5）
|
83-108
|
95.5
|
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EDTA 血浆（n=5）
|
89-101
|
97
|
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细胞培养液（n=5）
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95-111
|
102
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人IL-1β,IL-2,IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ 多因子酶联免疫试剂盒 Precision
批内精密度将三份已知浓度的样本在同一块酶标板上重复检测 20 次，以评估批内精密度。
批间精密度将三份已知浓度的样本在 20 次独立实验中分别检测，以评估批间精密度。实验由至少两名技术人员使用两个批次的试剂完成。.
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Within-Run Precision
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Inter-Batch Precision
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|||||
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Sample
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1
|
2
|
3
|
1
|
2
|
3
|
|
n
|
20
|
20
|
20
|
20
|
20
|
20
|
|
CV%
|
6.6
|
5.5
|
5.2
|
8.3
|
7.5
|
6.9
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Result Determination
- 各样本及标准品的 OD 值均应扣除空白孔 OD 值进行校正。
- 手工绘制标准曲线：以标准品浓度为Y 轴，对应 OD 值为X 轴绘制标准曲线，用平滑曲线连接各坐标点。将样本 OD 值代入标准曲线方程即可计算样本浓度。建议使用专业曲线拟合软件（如 Curve Expert 1.3）进行结果分析与计算。
- 若样本 OD 值高于标准曲线中最高浓度标准品的 OD 值，应对样本进行稀释（或进一步稀释）后重新检测。计算最终浓度时，将测得浓度乘以稀释倍数。
Precautions
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01标准品复溶后不可再次保存，复溶后请勿再次冻存。
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02因运输过程中振荡、倒置，试剂盒内各试剂瓶 / 管可能需要离心，使液体汇集于底部。可手动摇匀或 1000 rpm 离心 1 分钟。
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03浓缩洗涤液可能出现轻微结晶，稀释时可水浴助溶，配制洗涤液时必须完全溶解。
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04配制后的标准品仅限一次性使用，请勿重复使用已加样检测的标准品；如需重复实验，请使用另一支标准品。
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05仅使用本试剂盒配套试剂 / 组分，不得混用其他订单批次或不同试剂盒的组分。
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06确保试剂充分混匀。微孔板内试剂的充分混匀对结果准确性尤为重要，建议使用微量振荡器（最低频率）；若无振荡器，可手动轻轻圆周振荡 1 分钟。
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07实验开始前，务必使试剂盒恢复至室温。
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08标准品建议设置复孔或三复孔检测。
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09未使用的酶标板条放回铝箔袋，于 2～8℃ 保存（适用于短期内使用）。
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10显色剂对光敏感，避光保存与使用。
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11过期试剂盒禁止使用。
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12采用双波长检测时，波长设置为 450 nm 和 630 nm。
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13所有样本、洗涤液及废弃物均按生物危害废物处理。显色终止液 C 为 1 mol/L 硫酸，使用时注意安全。
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14样本必须使用移液器等仪器加样，实验前校准仪器以避免误差。加样应快速，建议控制在 5 分钟内完成，可使用多道移液器。
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15封板膜不可重复使用，若仅使用部分板条可按需裁剪，使用后立即丢弃。
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16每次实验均需重新绘制标准曲线。若样本浓度过高（OD 值高于最高浓度标准品孔），按一定倍数稀释，并在最终计算时乘以稀释倍数。
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17含叠氮钠（NaN₃）的样本不可检测，因 NaN₃会抑制辣根过氧化物酶（HRP）活性。
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18使用洗板机洗板时，每孔洗涤液体积应略大于 350 μL，确保加样针无堵塞；手工洗板时，吸水材料应洁净无污染，避免交叉污染。
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19加入显色终止液 C 终止反应后，10 分钟内读取 OD 值。
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20若设置复孔，采用复孔均值计算结果。
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21溶血样本可能导致假阳性，不适合使用本试剂盒检测。
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22实验过程中，环境湿度尽量控制在 60% 左右。
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23建议定期检查恒温设备及校准，确保孵育温度稳定在 37℃。